Набор для обнаружения Escherichia coli и Shigella FoodProof Detection Kit
ПЦР-набор для качественного обнаружения ДНК Escherichia coli и Shigella spp. методом ПЦР в реальном времени. Специально разработан для работы на платформах LightCycler Carousel-Based System и LightCycler 480 II System.
Набор рассчитан на 96 реакций с конечным объемом реакции 20 мкл. Совместимость с различными системами LightCycler обеспечивает гибкость использования в лабораторных условиях.
| Параметр | Значение |
|---|---|
| Метод анализа | ПЦР в реальном времени с гибридизационными зондами |
| Обнаруживаемые мишени | Escherichia coli и Shigella spp. |
| Количество реакций | 96 |
| Объем реакции | 20 мкл |
| Системы детекции | LightCycler Carousel-Based, LightCycler 480 II |
| Каналы детекции | F2/640 (E. coli/Shigella), F3/705 (внутренний контроль) |
| Условия хранения | -15...-25 °C, защищать от света |
Набор включает все необходимые компоненты для проведения полноценного анализа, включая внутренний контроль для исключения ложноотрицательных результатов. Система защиты от контаминации с UNG ферментом обеспечивает надежность результатов.
Процедура анализа включает этап предынкубации для активации UNG и денатурации ДНК, 45 циклов амплификации с детекцией в двух флуоресцентных каналах и окончательное охлаждение системы. Протоколы оптимизированы для различных версий программного обеспечения LightCycler.
| Компонент | Назначение |
|---|---|
| Master Mix (желтая крышка) | Готовые праймеры и зонды для E. coli/Shigella и внутреннего контроля |
| Enzyme Solution (красная крышка) | Taq полимераза и UNG гликозилаза |
| Internal Control (белая крышка) | Плазмидная ДНК для контроля амплификации |
| Control Template (фиолетовая крышка) | Положительный контроль ПЦР |
| H₂O PCR-grade (прозрачная крышка) | Отрицательный контроль |
Подготовка ПЦР-смеси включает смешивание 13 мкл Master Mix, 1 мкл Enzyme Solution и 1 мкл Internal Control на реакцию. После добавления 5 мкл образца ДНК общий объем реакции составляет 20 мкл. Для капиллярных систем требуется центрифугирование при 700 × g в течение 5 секунд.
Интерпретация результатов проводится по анализу кривых амплификации в двух каналах детекции. Положительным считается образец с характерной кинетикой в канале F2/640. Наличие сигнала во внутреннем контроле обязательно для валидации отрицательных результатов.
Набор требует предварительной калибровки цветовой компенсации для каждого прибора LightCycler. После ремонта оптической системы необходимо создание нового объекта цветовой компенсации с использованием специальных наборов реагентов.
Процедура работы включает физическое разделение рабочих зон для подготовки ДНК, постановки ПЦР и амплификации для минимизации риска контаминации. Все манипуляции должны проводиться в условиях, исключающих присутствие нуклеаз.
Система защиты от контаминации основана на замене dTTP на dUTP и использовании термолабильной UNG гликозилазы, которая эффективно разрушает продукты предыдущих амплификаций. Нативная ДНК мишеней не содержит урацил и не подвергается деградации.
Набор прошел функциональное тестирование на системе LightCycler Carousel-Based System. Все компоненты производятся в соответствии со строгими стандартами контроля качества и сохраняют стабильность в течение всего срока годности при правильном хранении.
Общие положения
Понятие и состав персональных данных
